ESTUDIO RETROSPECTIVO
Baxter A. Elliot, Allison C. Boone, Aneg L. Cortes, Tahseen Aziz, Isabel M. Gimeno
NC STATE UNIVERSITY
College Veterinary Medicine
Population Health and Pathobiology
DE TUMORES DE ORIGEN
DESCONOCIDO EN
REPRODUCTORAS
PESADAS EN EE.UU.
(2011 - 2020)
De forma esporádica, se han
descrito tumores linfoides
de etiología desconocida en
reproductoras pesadas.
En algunos casos, se han relacionado
con la presencia de retrovirus
endógenos que se replican por
completo.
En otros, la etiología permanece
desconocida.
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DE TUMORES DE ORIGEN
En este estudio, realizamos un trabajo
retrospectivo (enero de 2011 hasta
febrero de 2020) de todos los casos de
reproductoras pesadas comerciales
que se enviaron al Sistema de
Laboratorio de Diagnóstico Veterinario
de Carolina del Norte (NCVDLS) y se les
diagnosticó leucosis linfoide (LL) y/u
otros sarcomas.
Además, hemos incluido seis
casos adicionales en los que se
realizó un diagnóstico molecular
adicional en la Universidad
Estatal de Carolina del Norte para
descartar la enfermedad de Marek,
la reticuloendoteliosis y los virus
de leucosis aviar exógenos más
comunes.
La histopatología reveló LL de manera
aislada, LL y sarcomas histiocíticos u
otro tipo de sarcomas. El genoma del
MDV oncogénico estaba en niveles de
latencia y no se encontró ADN proviral
de ALV-A, ALV-B/D, ALV-J y/o REV.
En este artículo, se discutirá el papel
de los retrovirus endógenos y cómo
la vacuna SB-1 puede aumentar la
incidencia de tales tumores.
Todos los casos incluidos en este
estudio fueron de reproductoras
pesadas. De los 42 casos incluidos, 20
fueron diagnosticados por el NCVDLS
como LL, 4 como LL y sarcomas,
y 10 como otro tipo de sarcomas,
principalmente fibrosarcomas y
sarcomas histiocíticos.
Desde 2011 hasta 2016, la incidencia
fue baja (1-2 casos por año) pero
aumentó en 2017 (6 casos), 2018
(19 casos) y 2019 (10 casos). La
información de 2020 cubre solo dos
meses y hubo un caso.
Todos los casos remitidos a NCSU
reportaron alta frecuencia de
tumores en la mortalidad de
parvadas sin problemas de
salud ni de producción.
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INTRODUCCIÓN
MATERIAL Y MÉTODOS
Las lesiones de leucosis linfoide (LL)
pueden aparecer de manera espontánea
o ser inducidas por varios virus, incluido:
El virus de la leucosis aviar (ALV)
exógeno;
ALV endógeno;
Reticuloendoteliosis (REV).
Mientras que los tumores inducidos
por ALV endógenos y los que ocurren
espontáneamente no tienen mayor
relevancia económica, los inducidos por
ALV o REV exógenos sí.
Por este motivo, la relevancia de
realizar más pruebas diagnósticas
para evaluar la etiología. Se seleccionaron casos de
reproductoras pesadas diagnosticados
como LL, sarcomas histiocíticos (HS)
y/u otros sarcomas por histopatología
e inmunohistoquímica por el NCVDLS
entre Enero del 2011 a Febrero del 2020
(objetivo 1).
Seis casos adicionales con las mismas
características histopatológicas
que los anteriores fueron evaluados
molecularmente en NCSU (objetivo 2).
Los tejidos fueron fijados en formalina al
10%, deshidratados e incluidos en parafina
de forma rutinaria. Secciones de 5 μm
se tiňeron con hematoxilina y eosina y se
examinaron en el microscopio.
Selección de casos
Histopatología
En los últimos años, ha
aumentado el número de
casos de reproductoras
pesadas con tumores
remitidos al NCVDLS.
OBJETIVO
Los objetivos de este estudio fueron:
Evaluar la incidencia de lesiones LL
en casos de diagnóstico presentados al
NCVDLS entre 2011 y 2020.
Investigar más a fondo la etiología
de estos tumores utilizando técnicas
moleculares.
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Las tinciones con los anticuerpos
monoclonales CD3 (1:150; DAKO) y
PAX5 (1:50; BD) se llevaron a cabo en
un Thermo Autostainer 360 con sustrato
ImmPACT AEC, cromatógeno Peroxidasa
roja y contratinción con Hematoxilina de
Mayer.
Los controles positivos fueron
secciones de bolsa de Fabricio y timo
de controles negativos, así como
tinciones en el que el anticuerpo
primario se sustituyó con buffer.
El ADN fue extraído de tumores
congelados o de impresiones de tumores
tomadas en tarjetas FTA. Se usaron
cebadores específicos para los virus de
Marek oncogénicos y para DNA proviral
de REV, ALV-A, ALVB/D y ALV-J (Tabla 1).
Las muestras se consideraron
negativas cuando el gen del pollo
GAPDH usado como control interno
se amplificó pero el gen del virus no.
Las condiciones del qPCR usadas han
sido publicadas previamente.
Inmunohistoquímica gPCR
Tabla 1.
GEN SECUENCIA OBJETIVO
GAPDH
5’GGAGTCAACGGATTTGGCC-3’ Directo
5’TTTGCCAGAGAGGACGGC-3’ Inverso
pp38 MDV-1 menos CVI988
5’- GAGGGAGAGTGGCTGTCAAA -3’ Directo
5’- TCCGCATATGTTCCTCCTTC -3’ Inverso
Proviral ALV-A
5’-CGAGAGTGGCTCGCGAGATGG-3’ Directo
5’-CCCATTTGCCTCCTCTCCTTGTA-3’ Inverso
Proviral ALV-B/C
5’-CGAGAGTGGCTCGCGAGATGG-3’ Directo
5’-AGCCGGACTATCGTATGGGGTAA-3’ Inverso
Proviral ALV-J H5/H7
5’-GGATGAGGTGACTAAGAAAG-3’ Directo
5’-CGAACCAAAGGTAACACACG-3’ Inverso
Proviral REV
5’-CATACTGGAGCCAATGGTT-3’ Directo
5’-AATGTTGTACCGAAGTACT-3’ Inverso
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RESULTADOS
Figura 1. Frecuencia de tumores en reproductoras pesadas diagnosticados en el NCVDL como leucosis linfoide (LL), Sarcomas
(fibrosarcomas y/o sarcomas histiocíticos), o LL más sarcomas histiocíticos (HS)
Tabla 2. Edad promedio a la que se diagnosticaron distintos
tipos de tumores
25
20
#c
as
os
15
10
5
2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017 2018
LL Sarcomas LL+HS
2019 Ene-Feb
2020
Figura 2. HS en el bazo. Tinción H&E. Ampliación
a 2X (A) y 40X (B)
# casos
Edad media
(semanas)
LL 28 34
Sarcomas 10 50
LL+HS 4 38
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Figura 3. Linfoma en Bolsa de Fabricio. Tinción
H&E. Ampliación a 2X (A) y 40X (B)
Figura 5. Tinción IHC CD3 (antígeno de células T)
en lesiones LL. Se presume que el bajo número de
células redondas con reactividad membranosa o
citoplasmática para CD3 son linfocitos de células
,T
reactivos mezclados con la población neoplásica. 40X
Tabla 3. Diagnóstico molecular de tumores que habían sido diagnosticados como LL por histopatología
Figura 4. Tinción IHC PAX5 (proteína activadora
específica de células B) en lesiones de leucosis LL.
40X.
Caso #
CtGAPDH
Ctpp38-onc
CtGAPDH/
CtALV-A
CtGAPDH/
CtALV-B/D
CtGAPDH/
CtAVL-J
CtGAPDH/ CtREV
1 neg neg neg neg neg
2 neg neg neg neg neg
3 neg neg neg neg neg
4 neg neg neg neg neg
5 neg neg neg neg neg
6 neg neg neg neg neg
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DISCUSIÓN
Hubo 42 casos que fueron
diagnosticados como LL (28), LL y HS (4),
y otro tipo de sarcomas, principalmente
fibrosarcomas y HS (10) por el NCVDLS.
Las características histológicas
(población celular hom*ogénea,
transformación intrafolicular en la bursa)
y los hallazgos inmunohistoquímicos
(tumores de células B) de los tumores
LL son idénticos a los inducidos por ALV
exógenos y REV.
Sin embargo, en los seis casos en los
que se realizó diagnóstico molecular
no se detectó ADN proviral de ALV
exógenos y/o REV; demostrando que
estas lesiones fueron inducidas por
retrovirus endógenos o se produjeron
espontáneamente.
Desde 2011 hasta 2016, la incidencia fue
baja (1-2 casos por año), pero aumentó
en 2017 (6 casos), 2018 (19 casos) y
2019 (10 casos).
El aumento de la incidencia desde
2017 podría ser real o podría
deberse a una mayor vigilancia en
años más recientes.
Las lesiones de LL/sarcoma
tienden a aparecer en parvadas de
reproductoras pesadas que, por lo
demás, están sanas y no tienen un
exceso de mortalidad.
Por lo tanto, es posible que los
casos se hayan pasado por alto
en el pasado.
Los resultados de este estudio
demuestran que no es raro
detectar tumores (LL y/o
sarcomas) en parvadas de
reproductoras pesadas
en ausencia de retrovirus
exógenos.
LL y HS se diagnosticaron en
parvadas más jóvenes (promedio de
34-38 semanas) que los sarcomas
(promedio de 50 semanas) como ya
se ha descrito previamente
en tumores inducidos por
retrovirus.
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Estudio retrospectivo de tumores de
origen desconocido en reproductoras
pesadas en EE.UU. (2011 - 2020)
DESCÁRGALO EN PDF
Es probable que los casos informados
en este estudio se deban a retrovirus
endógenos, ya que todos ellos involucran
pollos de emplume lento que portan
un retrovirus endógeno de replicación
completa (ev-21) en sus genomas.
Otros factores también podrían
contribuir a una mayor incidencia. Se
sabe que las vacunas MDV-2 (es decir,
SB-1) pueden potenciar las lesiones de
LL inducidas por retrovirus (REV, ALV
exógeno y ALV endógeno).
Si bien los ALV exógenos y REV podrían
tener consecuencias desastrosas para
la industria avícola, el ALV endógeno
y los tumores espontáneos tienen una
relevancia económica mínima.
Se desconocía el estado de vacunación de
los 42 lotes de reproductoras pesadas
presentados al NCVDLS.
Sin embargo, de los 6 casos evaluados
en NCSU, cinco de ellos fueron
vacunados con SB-1.
Curiosamente, las muestras en el
caso que no fue vacunado con SB-1
también dieron positivo para MDV-2
por qPCR y secuenciación del genoma
completo (resultados no presentados),
probablemente debido a una
exposición de campo.
Los mecanismos exactos por
los cuales MDV-2 incrementa la
frecuencia de LL no se conocen y
es necesario realizar más estudios.
Este estudio demuestra la
relevancia del diagnóstico
etiológico en casos de
lesiones de LL/sarcoma
en campo.
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